蓝基因app下载苹果,(2012•泰州三模)许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ'基因,其编码的产物B

文章 1年前 (2023) admin
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(2012•泰州三模)许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ'基因,其编码的产物B

(1)基因工程的核心步骤是构建基因表达载体,目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在,能遗传给后代,并表达和发挥作用.
(2)由图可知,目的基因的左侧有限制酶EcoRI的识别序列,右侧是限制酶Sma I的识别序列,而质粒上只有限制酶EcoRI的识别序列,所以需要用限制酶EcoRI来切割质粒,用限制酶EcoRI和Sma I来切割含有目的基因的外源DNA分子,这样就使目的基因右侧无法与质粒连接,所以目的基因被切割下来和质粒连接之前,需在目的基因的右侧连接限制酶EcoRI切割形成的末端,即-TTAA,连接过程中需要DNA连接酶.
(3)将目的基因导入大肠杆菌细胞之前,应先用Ca2+处理大肠杆菌,使其处于能吸收周围DNA的感受态.
(4)用限制酶EcoRI切割质粒时,会破坏质粒上的lacZ'基因,但切割后的质粒自身环化后,lacZ'基因又被修复,能表达产生B-半乳糖苷酶,在X-gal和IPTG 存在下,可以产生蓝色沉淀,使菌落呈现蓝色,所以菌落①②呈现蓝色;菌落③导入的是重组质粒,其lacZ'基因被破坏,不能表达产生B-半乳糖苷酶,在X-gal和IPTG 存在下,菌落颜色为白色.
(5)检测目的基因是否表达产生蛋白质,可采用抗原一抗体杂交法.
故答案:(1)使目的基因在受体细胞中稳定存在,能遗传给后代,并表达和发挥作用
(2)-TTAA  DNA连接酶
(3)Ca2+
(4)菌落③lacZ'标记基因区插入外源基因后被破坏,不能表达出3-半乳糖苷酶,故菌落为白色  
(5)抗原一抗体杂交

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