蓝基因的背题模式在哪里设置,DNA重组技术为什么要用到DNA复制啊,还有,T

文章 1年前 (2023) admin
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DNA重组技术为什么要用到DNA复制啊,还有,T

重组之后你需要复制重组的质粒或者DNA,所以需要DNA 的复制..一般作为载体的质粒都有原核或者真核的复制起点.
T-DNA是存在于农杆菌质粒上的一段DNA,这段DNA对于农杆菌自身非必需,由于这段序列在农杆菌侵染宿主时能整合到宿主基因组DNA中,人们利用这一特性,在转基因过程中使用农杆菌转化.即将农杆菌T-DNA序列替换为目的基因,利用农杆菌将其转入到宿主中(只对植物有用)..
标记基因,可想而知就是作为标记的一个基因..我们将重组DNA转入目的宿主中,如何检测其是否转入到宿主中?这就需要标记基因了,标记基因一般为抗性基因,或者一些必需营养因子等.植物中常用的如潮霉素抗性基因,卡那霉素抗性基因.微生物中常用安苄抗性.卡那霉素抗性,以及蓝白斑筛选,或者像酵母中用编码必需氨基酸的基因作标记基因..简言之,标记基因就是用作标记重组DNA是否转入目的宿主中.但是单纯的标记基因不能完全确定重组DNA是否转入宿主中.通常还需要其他一些检测手段配合使用,以确定标记基因是否转入宿主中.

外源基因与pUC18载体连接后,导入大肠杆菌细胞中,在选择性培养基中应该是挑取白斑还是蓝班

这属于蓝白斑筛选 挑白斑 野生型大肠杆菌产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝.编辑本段适用方面  设计适用于蓝白斑筛选的基因工程...

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DNA重组的流程

基本步骤1 目的基因的获得方法有:基因文库(cDNA文库、基因组文库)、PCR(放达效应)、人工合成2 目的基因与载体连接方法有:——粘性末端——全同源性、定向克隆(两种酶切)定向克隆可防止高背景的产生,因为全同源性会造成载体自连、重组子、目的基因自连三种可能,重组子可能还会出现正反插入的情况,使筛选过程复杂。——平末端酶切后也有可能产生平末端,也会出现高背景。——人工接头——连接子(连入带粘性酶切位点的片断,再酶切)、普适子(一条链连上片断,成为粘性末端)、T-A克隆(PCR中使用的Taq聚合酶会根据模板延伸至后在链末尾加上一个A,可在克隆载体上加上T,使之连接)、同聚物加尾(末端转移酶加尾)由于平末端连接效率比较低,可在其两端人工修饰反应体系:目的基因、载体、T4连接酶、缓冲液3 重组DNA导入受体(宿主)细胞——转化、转染、转导、感染主要运用的是原核转化(导入感受态细菌,感受态:处于易于吸收外缘DNA的状态,方法:氯化钙法:DNA与其形成羟基-磷酸钙复合物,抗DNase水解)、真核转染。4 筛选与鉴定方法:——遗传学(表形)——插入失活、蓝-白筛选、抗性基因(四环素Tet、氨苄青霉素Amp)——酶切,在电泳(分子量、构想)——PCR(特异性引物)——核酸杂交(southern blot)——免疫学方法(western blot)——DNA测序(sanger、焦磷酸测序)

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